WI-38人胚肺細(xì)胞的培養(yǎng)

細(xì)胞名稱：wi-38人胚肺細(xì)胞
平臺編號:zl-056586
wi-38人二倍體細(xì)胞系來自妊娠3個(gè)月的正常胚胎肺組織。該細(xì)胞系是首株用于人類疫苗制備的人二倍體細(xì)胞系。培養(yǎng)液中添加tnfalpha可以促進(jìn)細(xì)胞生長。
細(xì)胞特性
1）來源：正常肺
2）形態(tài)：成纖維細(xì)胞，貼壁生長
3）含量：>1x106細(xì)胞數(shù)
4）規(guī)格：t25瓶或者1ml凍存管包裝
5)用途：僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1ml凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）t25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將t25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5x顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8ml，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議t25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備mem培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，15%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%dmso，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6ml完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000rpm條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的pbs潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mmedta于培養(yǎng)瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%fbs的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000rpm條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面t25瓶為例；
1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
智立中特（武漢）生物科技有限公司是一家集生物研發(fā)，生產(chǎn)，銷售，為一體的高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)公司。擁有載體質(zhì)粒，載體，國內(nèi)外微生物菌種資源，感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)基，細(xì)胞株等廣泛的生產(chǎn)銷售線。
質(zhì)粒載體產(chǎn)品：
提供各種類型載體宿主，基因種屬類型，抗性，設(shè)計(jì)并構(gòu)建質(zhì)粒：大腸桿菌表達(dá)載體；哺乳動物表達(dá)載體；酵母表達(dá)載體；昆蟲表達(dá)載體；植物表達(dá)載體；廣;腺病毒載體...常用有pacyc184；pacycduet-1；pask-iba5plus+fus(人基因）；pax01；pbabe-puro；pbad24
pbi121；pbifc-bfosvc155；pbifc-vc15；pcdfduet-1；pcdh-cmv-mcs-ef1-puro；pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp-t2a-puro；pbifc-vn155(i152l)addgene27097；pcdh-mscv-mcs-ef1-copgfp-t2a-puro；pcaggs；pbifc-vn173(plasmid#22010)；pbluescriptsk(+)；pbluescriptiisk(+)；pbv220；pcas；pcas9
pbr322；pbt3-ste；pbudce4.1以及結(jié)合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒rp4；pgl4.25[luc2cp/minp];pgr106;pires2-acgfp1-nuc;psfgfp;phen1;pnl1.1[nluc];pbbr1-gfp；pbmtb-5;pbmtb-4;pbmtb-3;pbmtb-2;pcambia0305.1;pcx-dr;;pgreenii0800-mirna;pk7gwiwg2(i);prare;pdg1663
質(zhì)粒菌種產(chǎn)品：
e.colinissle1917；usa300：大腸桿菌jm108；希瓦氏菌屬mr-1；e.coliw3110野生型；釀酒酵母w303a；釀酒酵母invsc1；釀酒酵母by4741；釀酒酵母by4742；畢赤酵母smd1168h；pseudomonasputidakt2440；e.colimc1061；枯草芽孢桿菌wb800；根癌農(nóng)桿菌eha105；根癌農(nóng)桿菌gv3101；cen.pk2-1d；cen.pk2-1c；全耐藥鮑曼不動桿菌；哈維弧菌bb170
菌種產(chǎn)品：
提供模式菌種，科研菌種，普通菌種等菌種資源，有證質(zhì)控樣品等微生物標(biāo)準(zhǔn)品，芽孢懸液。常用藥典菌種如：大腸埃希氏菌cmcc（b）44102、黑曲霉cmcc（f）98003,白色念珠菌cmcc(f)98001,枯草芽孢桿菌cmcc（b）63501,銅綠假單胞菌cmcc（b）10104,生孢梭菌cmcc（b）64941;常用益生菌：長雙歧桿菌（bifidobacteriumlongum）,嗜熱鏈球菌（streptococcusthermophilus），鼠李糖乳桿菌（lactobacillusrhamnosus），類干酪乳桿菌（lactobacillusparacasei），干酪乳桿菌（lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437botrytiscinerea；靈芝，香菇，茯苓等
原代細(xì)胞和細(xì)胞系產(chǎn)品：
現(xiàn)取不同組織現(xiàn)分：不同來源人/鼠/兔/豬等不同組織如肺、氣管、支氣管、甲狀腺、胰腺、垂體、腎上腺、扁桃體、胸腺、腎、膀胱、輸尿管、前列腺、心臟、血管。常用原代細(xì)胞有：氣管上皮細(xì)胞；前列腺上皮細(xì)胞；膀胱上皮細(xì)胞；輸尿管上皮細(xì)胞；腎足細(xì)胞；內(nèi)皮祖細(xì)胞；輸卵管上皮細(xì)胞；乳腺上皮細(xì)胞
公司提供細(xì)胞系人源做過str鑒定，其他做過種屬鑒定，確保產(chǎn)品無誤后方可提供客戶，形式凍存或復(fù)蘇節(jié)省客戶時(shí)間；確保實(shí)驗(yàn)順利。常用細(xì)胞系有：wb-f344細(xì)胞；rg2[d74]細(xì)胞；nrk細(xì)胞；a7r5細(xì)胞；l6細(xì)胞；umnsah/df-1細(xì)胞；mdbk(nbl-1)細(xì)胞；mdbk細(xì)胞；ccc-smc-1細(xì)胞；ptk1(nbl-3)細(xì)胞；mv1lu細(xì)胞；mv.1.lu(nbl-7)細(xì)胞；f81細(xì)胞；crfk細(xì)胞；mltc-1細(xì)胞；ms1細(xì)胞；c3h/10t1/2,clone8細(xì)胞；gl261細(xì)胞；p3x63ag8.653細(xì)胞；hcc38細(xì)胞；zr-75-30細(xì)胞；sk-lu-1細(xì)胞；nci-h2087細(xì)胞；sk-n-mc細(xì)胞；hs895.t細(xì)胞